二代測序(Next-Generation Sequencing,NGS)是指使用高通量平臺同時對大規模DNA或RNA進行快速、準確、低成本的測序技術。在這個過程中,二代測序酶起到了重要作用。
二代測序酶主要分為兩類:聚合酶和核苷酸轉移酶。
1. 聚合酶
聚合酶是進行DNA擴增的關鍵工具,在PCR (Polymerase Chain Reaction) 過程中發揮著重要作用。其中最常見的是Taq DNA polymerase和Phusion DNA Polymerase兩種。
Taq DNA polymerase即熱穩定型聚合酶,能夠耐受較高溫度條件下的反應,并且擴增產物含有A尾巴(Adenines),適用于目標片段長度較短且含有AT富集區域時使用;而Phusion DNA Polymerase則由多個不同來源的DNA polymerases組成復雜結構體系,在保證特異性與靈敏度基礎上, 具備更好的擴增效率、精準性及拓展模板長度等優點。
2. 核苷酸轉移 酶
核苷轉移脫氧核糖體(Nucleotide Transfer and Deoxyribonucleotide Transfer)也稱為內切酶,是一類蛋白質酶,在DNA測序過程中扮演著重要的角色。這些內切酶可以短小地識別和結合到DNA上,并在特定核苷酸位點處水解化學鍵,釋放出部分堿基或其它標記物。
總之, 二代測序酶作為高通量平臺進行快速、準確、低成本的基因組學研究所必備的關鍵工具, 具有極其重要和不可替換的作用。